酶標儀(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的生物化學分析技術(shù),用于檢測和定量分析樣品中特定分子的存在和濃度。其工作原理基于酶的催化作用和抗原-抗體的特異性結(jié)合反應。

酶標儀的工作原理如下:
1. 固相吸附:首先,在酶標板或其他固相載體上,將特定抗原或抗體固定下來。這可以通過物理吸附、共價鍵結(jié)合或特異性親和力來實現(xiàn)。
2. 樣品孵育:待測樣品(如血清、尿液等)與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應,形成特定抗原-抗體復合物。
3. 洗滌:通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的物質(zhì),以減少假陽性信號。
4. 酶標記物添加:添加與待測分子特異性結(jié)合的酶標記物(如辣根過氧化物酶,HRP),酶標記物可以與抗原-抗體復合物結(jié)合。
5. 反應底物:添加適當?shù)牡孜?,酶標記物催化底物的反應,產(chǎn)生可測量的信號。常用的底物有TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)或ABTS(2,2'-聯(lián)氨基二乙基-6,6'-二氯苯胺)等。
6. 反應終止:通過添加適當?shù)姆磻K止劑,停止底物的反應過程。
7. 讀取結(jié)果:使用酶標儀測量底物反應生成的顏色或熒光強度,與待測物質(zhì)的濃度成正比。
酶標儀的應用包括但不限于以下幾個方面:
1. 生物醫(yī)學研究:酶標儀可以用于檢測蛋白質(zhì)、抗體、激素等生物分子,用于疾病機制的研究、新藥的篩選和藥物代謝的分析等。
2. 臨床診斷:酶標儀可以用于檢測血清、尿液等樣本中的生物標志物,用于疾病的診斷和監(jiān)測,如艾滋病、癌癥、心血管疾病等。
3. 食品安全:酶標儀可以用于檢測食品中的殘留物、過敏原、致病菌等,保障食品的質(zhì)量和安全。
4. 環(huán)境監(jiān)測:酶標儀可以用于檢測水體、土壤等環(huán)境樣品中的污染物,如重金屬、有機物等,有助于評估環(huán)境質(zhì)量和污染程度。
總之,酶標儀通過酶標記物與特定抗原或抗體的結(jié)合反應,利用酶的催化作用產(chǎn)生可測量的信號,實現(xiàn)對特定分子的檢測和定量分析。其應用廣泛,涵蓋了生物醫(yī)學研究、臨床診斷、食品安全和環(huán)境監(jiān)測等領域。